PCR múltiplex para el diagnóstico de microorganismos atípicos transmitidos sexualmente / Multiplex PCR testing for the atypical microorganisms diagnosis sexually transmitted

Resumen Antecedentes: Las infecciones de transmisión sexual son un problema de salud pública mundial. El análisis rutinario incluye solo pruebas microbiológicas y serológicas para el diagnóstico de patógenos. Los microorganismos atípicos como Chlamydia trachomatis y micoplasmas no son identificados debido a los requerimientos. Además, no es incluida Gardnerella vaginalis, aunque se asocia a la vaginosis bacteriana. Objetivo: Desarrollar una PCR múltiplex para el diagnóstico de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis. Método: Se estandarizó la PCR múltiplex utilizando oligonucleótidos para C. trachomatis (gen ompA, orf6 plasmídico), Mycoplasma/Ureaplasma y G. vaginalis (genes rRNA16s). Resultados: Se estandarizaron pruebas de PCR múltiplex para los microorganismos estudiados, optimizándose las concentraciones y condiciones de las reacciones múltiplex. Se obtuvieron PCR dúplex para C. trachomatis (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella y Chlamydia/micoplasmas y tríplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma. También un cuádruplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma/Gardnerella. Los resultados fueron verificados por PCR e hibridación automática (HybriSpot 12) y análisis in silico. Conclusión: Se desarrollaron pruebas de PCR múltiplex con una alta sensibilidad y especificidad para la identificación de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis.

Abstract Background: Sexually transmitted infections are a global public health problem. Routine analysis includes microbiological and serological tests for the diagnosis of pathogens. Atypical microorganisms such as Chlamydia trachomatis and mycoplasmas are not determined due to the requirements for their identification. Furthermore, Gardnerella vaginalis is not included despite being associated with bacterial vaginosis. Objective: To develop a multiplex PCR to diagnose Chlamydia, mycoplasmas, and Gardnerella. Method: Standardization of multiplex PCR tests was carried out using oligonucleotides for the identification of Chlamydia (ompA gene, plasmid orf6), Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella (rRNA16s genes). Results: Multiplex PCR tests were standardized for the microorganisms studied, optimizing the concentrations and conditions of the multiplex reactions. Duplex PCR was obtained for Chlamydia (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella, and Chlamydia/mycoplasmas, and triplex PCR for Chlamydia/mycoplasmas. Also, a quadruplex for Chlamydia, Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella. PCR and automatic hybridization verified the results obtained (HybriSpot 12) and in silico analysis. Conclusion: Multiplex PCR tests with high sensitivity and specificity were developed to identify C. trachomatis, mycoplasmas, and G. vaginalis.

Detection by multiplex PCR of Mycoplasma species associated with dairy cattle in Argentina / Detección por PCR multiplex de especies de Mycoplasma asociadas a ganado lecheroen Argentina

Abstract There is scarce information about the frequency and epidemiological and clinicalfeatures associated with the presence of Mycoplasma spp. in Argentine dairy herds. The objec-tives of this study were to develop a multiplex PCR for identifying M. bovis and M. canadenseand to describe the frequency of Mycoplasma spp. isolated from clinical samples submitted to adiagnostic laboratory. Of a total of 1548 samples from intramammary infections, bulk tank milkand biological fluids, 38 Mycoplasma isolates were obtained. M. bovis, M. canadense, M. cali-fornicum and M. leachii were detected by using two multiplex PCRs, confirming their presencein clinical conditions in dairy cattle. The techniques used in the present study can be usefulto broaden the knowledge about Mycoplasma infections in cattle, since the search for theseorganisms is not usually included in routine diagnoses.

Resumen Existe poca información sobre la frecuencia, así como las características epidemi-ológicas y clínicas asociadas con la presencia de Mycoplasma en los rodeos lecheros argentinos.Los objetivos de este estudio fueron desarrollar una PCR multiplex para identificar M. bovis yM. canadense y describir la frecuencia de especies de Mycoplasma aisladas de muestras clíni-cas enviadas a un laboratorio de diagnóstico. De un total de 1.548 muestras de infeccionesintramamarias, leche de tanque de frío y fluidos biológicos, se obtuvieron 38 aislamientos de Mycoplasma. Mediante 2 PCR multiplex se detectaron M. bovis, M. canadense, M. californicumy M. leachii, confirmando su presencia en síndromes clínicos en ganado lechero. Las técnicasutilizadas en el presente estudio pueden ser útiles para ampliar el conocimiento sobre las infec-ciones por Mycoplasma en bovinos, ya que la búsqueda de estos organismos no suele incluirseen los diagnósticos de rutina.

Response to doxycycline and oxytetracycline treatments in cats infected with Mycoplasma spp. and analysis of haemato-clinical findings and risk factors

@#This study was planned to determine the efficacy of doxycycline and oxytetracycline in the treatment of feline Mycoplasma spp. infections and to analyze risk factors as well as clinical and haematological findings. Cats accepted to the clinic with complaints such as weakness, loss of appetite and fever were routinely examined. Clinical history of animal was demanded from the owner. An interview and a short questionnaire were conducted to owner to evaluate the risk factors associated with possible Mycoplasma status of animal. During the interview, the age, sex, breed, housing, flea infestation, worm control, external parasite control, other accompanying infections and vaccination status of cats were asked and the data recorded. Peripheral blood smears were stained with the DIFF-QUICK. Fifty positive cats were included in the study, 16 of which were treated with doxycycline (orally, 5 mg/kg twice a day) while other 34 with oxytetracycline (intramuscular injection, 10 mg/kg once a day). It was determined that all (100%) cats with Mycoplasma spp. infection had a flea infestation. Majority of cats (94%) did not receive the regular antiparasitic application and only 6 (12%) of them had complete vaccinations. Mycoplasma spp. infection was associated with younger age and outdoor access. Among the feline breed, striped cat (74%) was more prone to infection. The most common clinical signs encountered in cats were weakness (94%) and anorexia (84%). Haematological parameters revealed thrombocytopenia (86%), and anaemia (40%) in infected cats. At the end of the treatment, recovery rates for doxycycline and oxytetracycline groups were 87.5% and 67.6%, respectively. General status of these cats indicated significant improvement on the 4th day of treatment, and clinical symptoms are restored on the 7th day. Mycoplasmosis is an important infection for cats having anaemia, thrombocytopenia and leukocytosis. Flea infestations are risk factor for contamination of the disease. Based on our results, we recommend doxycycline treatment (5 mg/kg) for up to 21 days for elimination of Mycoplasma spp. in the blood of infected cats.

Investigation of Mycoplasma spp. in birds of the Rio de Janeiro Zoo by isolation and PCR / Investigação de Mycoplasma spp. em aves do Zoológico do Rio de Janeiro por isolamento e PCR

Brazil is one of the countries with the most abundant avifauna in the world. The confinement of birds associated with close contact with other animals and humans favor the spread of agents of respiratory diseases. Among them, mycoplasmas can cause asymptomatic or apparent disease that manifests in birds by coughing, sneezing, rales, conjunctivitis, ocular and nasal discharge. Several described mycoplasmas cause disease in birds, especially Mycoplasma gallisepticum(MG) andMycoplasma synoviae(MS). The diagnosis ofMycoplasmaspp. can be done by clinical observation and laboratory analysis. Molecular diagnosis by PCR was boosted by its speed, sensitivity, and low cost of agent isolation techniques that take up to 21 days to complete. This study aimed to verify the occurrence ofMycoplasmaspp. in birds of the Rio de Janeiro Zoo (Rio Zoo), by isolation and PCR. Of the total 635 birds from the Rio Zoo, 81 were studied for detection ofMycoplasmaspp., when taken for routine health assessment exams. These birds belonged to the following orders: Psittaciformes (45), Accipitriformes (18), Galliformes (7), Piciformes (5), Strigiformes (4), Falconiformes (1) and Cariamiformes (1), all individuals already identified by microchip or leg-ring. There was no isolation of mycoplasmas in any of the samples tested, whereas, in the PCR, 62.96% (51/81) were positive, with 1.96% (1/51) identified as MG and 19.61% (10/51) as MS, representing 1.23% (1/81) and 12.34% (10/81) of the total population studied. PCR was shown to be a more effective technique than isolation in the detection ofMycoplasmaspp. in birds. It was possible to detect mycoplasmas in birds from Riozoo with no clinical respiratory signs, with higher MS prevalence than MG. The positivities forMycoplasmaspp., MS, and MG were different among the orders studied, being the highest occurrence in birds of prey, followed by Galliformes and Piciformes. The presence of MG and MS in birds of Rio de Janeiro Zoo confirms the circulation of these agents and the need for further studies on the dissemination of mycoplasmas in zoos for the epidemiological analysis of these bacteria in these places.(AU)

O Brasil é um dos países com maior avifauna do mundo. O confinamento de aves associado ao contato próximo a outros animais e seres humanos favorece a disseminação de agentes etiológicos causadores de doenças respiratórias. Dentre eles, os micoplasmas podem causar doença assintomática ou aparente que se manifesta em aves por espirros, estertores, conjuntivite, corrimentos oculares e nasais. São diversos os micoplasmas descritos causadores de doença em aves, com destaque para Mycoplasma gallisepticum (MG) e Mycoplasma synoviae (MS). O diagnóstico de Mycoplasma spp. pode ser feito pela observação clínica e análises laboratoriais. O diagnóstico molecular pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) ganhou impulso por sua rapidez, sensibilidade e baixo custo em relação às técnicas de isolamento do agente que levam até 21 dias para conclusão do gênero Mycoplasma. Objetivou-se verificar a ocorrência da infecção por Mycoplasma spp. em aves no Zoológico do Rio de Janeiro (Rio Zoo), por isolamento e PCR. Do plantel de 635 aves do Rio Zoo, foram estudadas 81 para detecção de Mycoplasma spp., quando contidas para exames rotineiros de avaliação da condição de saúde. Essas aves eram pertencentes às ordens Psittaciformes (45), Accipitriformes (18), Galliformes (7), Piciformes (5), Strigiformes (4), Falconiformes (1) e Cariamiformes (1), todas já identificadas por microchip ou por anilha. Não houve isolamento de micoplasmas em nenhuma das amostras testadas, enquanto na PCR, 62,96% (51/81) foram positivas, sendo 1,96% (1/51) identificadas como MG e 19,61% (10/51) como MS, representando 1,23% (1/81) e 12,34% (10/81) da população total estudada. A PCR demonstrou ser uma técnica mais efetiva que o isolamento na detecção de Mycoplasma spp. em aves. Foi possível detectar micoplasmas nas aves do Riozoo sem sinal clínico respiratório, tendo MS maior prevalência do que MG. As positividades para Mycoplasma spp., MG e MS foram diferentes entre as ordens de aves estudadas, sendo a maior ocorrência nas aves de rapina, seguida dos Galliformes e dos Piciformes. A presença de MG e MS nas aves do Rio de Janeiro Zoo confirma a circulação destes agentes e a necessidade de mais estudos sobre a disseminação de micoplasmas em zoológicos para análise epidemiológica dessas bactérias nesse local.(AU)

Bacteria isolated from the lower respiratory tract of sheep and their relationship to clinical signs of sheep respiratory disease / Bactérias detectadas no trato respiratório inferior de ovinos e a relação com as manifestações clínicas da doença respiratória ovina

Respiratory diseases are among the most important diseases in sheep flocks. Herein was studied the bacterial etiology of respiratory disease and the clinical signs of 99 female and male sheep breed in the states of São Paulo (SP) and Rio de Janeiro (RJ), Brazil. After physical examination of animals, tracheobronchial flushing samples were obtained. The usual bacteria and Mycoplasma spp. were searched, as well as their association with the clinical status and clinical signs of sheep with respiratory disease. The main observed signs were: tachypnea (75%), increase of rectal temperature (09.4%), mucopurulent/purulent nasal discharge (21.9%), cough (25%), dyspnea (31.2%), changes of lung sounds at auscultation (87.5%) and chest percussion (28.1%) in pneumonic sheep. Non-fermenting gram-negative bacteria and Bacillus sp. were the most isolated bacteria. Microorganisms of the Mollicutes class were molecularly (PCR) detected in 33.3% of the animals. In addition, the specific detection of M. mycoides subsp. capri was described for the first time in sheep from the state of São Paulo, Brazil.(AU)

A doença respiratória é uma das doenças mais importantes em rebanhos ovinos. Esta pesquisa teve como objetivo determinar a etiologia bacteriana da doença respiratória e sua relação com sinais clínicos em ovinos criados nos estados de São Paulo e Rio de Janeiro, Brasil. Noventa e nove ovelhas machos e fêmeas dos Estados de São Paulo (SP) e Rio de Janeiro (RJ) foram estudadas. Após o exame físico, amostras de lavagem traqueobrônquica foram obtidas. A presença de bactérias aeróbias e Mycoplasmaspp. foram estudados, assim como a associação entre os microrganismos e estado clínico e sinais clínicos de doença respiratória em ovinos. As principais manifestações clínicas observadas foram: taquipneia (75%), alta temperatura retal (09,4%), secreção nasal mucopurulenta/purulenta (21,9%), tosse (25%), dispneia (31,2%), sons pulmonares alterados na ausculta (87,5%) e na percussão torácica (28,1%) em ovelhas pneumônicas. Bactérias gram-negativas não fermentadoras e Bacillus sp. foram as bactérias mais isoladas. Microrganismos da classe Mollicutes foram detectados molecularmente (PCR) em 33,3% dos ovinos. Além disso, descreve-se pela primeira vez no estado de São Paulo, Brasil, a detecção do M. mycoides subsp. capri na espécie ovina utilizando a reação de polimerase em cadeia.(AU)

Bacterial pathogens of the lower respiratory tract of calves from Brazilian rural settlement herds and their association with clinical signs of bovine respiratory disease / Patógenos bacterianos do trato respiratório inferior de bezerros criados em rebanhos de assentamentos brasileiros e sua associação com os sinais clínicos da doença respiratória dos bovinos

Bovine respiratory disease (BRD) is considered the major cause of economic losses in dairy and beef cattle production. The study aimed to detect the most important bacteria related to respiratory disease in tracheobronchial fluid samples of healthy and dairy calves with clinical signs of BRD in Brazilian rural settlements. Hundred and forty-one mongrel dairy calves were randomly selected from 42 family farm dairy herds from Brazilian settlements. Physical examination was performed and calves were classified as healthy (n=100) and BRD (n=41). Tracheobronchial fluid samples were collected. Isolation and molecular detection of Mycoplasma dispar, M. bovis and M. mycoides subsp. mycoides SC besides isolation of other aerobic bacteria were performed. Abnormal lung sounds (crackle/snoring/whistle), mucopurulent/purulent nasal discharge, body temperature >39.5°C and respiratory rate >40 breaths/min were higher in BRD calves compared to healthy calves (P<0.05). Bacillus sp., Staphylococcus intermedius and non-fermentative Gram-negative were the most prevalent bacteria isolated. Non-identified species from Enterobacteriaceae family was higher in BRD calves compared to healthy calves (P<0.05). Mollicutes were isolated in 7.4% of samples and only M. dispar was detected. Mollicutes was associated with purulent/mucopurulent nasal discharge (P=0.017). Pantoea agglomerans was associated to tachypnea (P=0.020), and Streptococcus spp. was associated with hyperthermia. Statistical tendencies were observed to M. dispar and tachypnea (P=0.066), and P. agglomerans and tachycardia (P=0.066). The obtained results describe the microorganisms found in tracheobronchial fluid of calves with BRD in some herds of Brazilian family farming and their relation to clinical signs of BRD.(AU)

A doença respiratória dos bovinos (DRB) é considerada a principal causa de perdas econômicas nas produções de leite e carne. O objetivo deste estudo foi detectar as mais importantes bactérias relacionadas a doença respiratória presentes em amostras de lavado traqueobrônquico de bezerros sadios e com sinais clínicos da DRB de assentamentos brasileiros. Cento e quarenta e um bezerros leiteiros sem raça definida foram randomicamente selecionados de 42 rebanhos leiteiros de assentamentos brasileiros. Exame físico foi realizado e os animais foram classificados em sadios (n=100) e com DRB (n=41). Amostras de lavado traqueobrônquico foram coletadas. Foram realizados o isolamento e a detecção molecular de Mycoplasma dispar, M. bovis e M. mycoides subsp. mycoides SC além de isolamento de outras bactérias aeróbias. Ruídos pulmonares anormais (crepitação/ ronco/sibilo), secreção nasal mucopurulenta/purulenta, temperatura corporal >39.5°C e frequência respiratória >40 movimentos respiratórios/min foram observados com maior frequência em bezerros com DRB comparado aos animais sadios (P<0.05). Bacillus sp, Staphylococcus intermedius e bactérias Gram-negativas não fermentadoras foram as bactérias mais prevalentes. Bactérias da família Enterobacteriaceae cuja espécie não fora identificada foram mais frequentes em bezerros com DRB comparado aos bezerros sadios (P<0.05). Mollicutes foram isolados em 7,4% das amostras e somente M. dispar foi detectado. Mollicutes foi associado à secreção nasal purulenta/mucopurulenta (P=0.017). Pantoea agglomerans foi associada a taquipneia (P=0.020), e Streptococcus spp. Foi associado a hipertermia. Tendência estatística foi observada para M. dispar e taquipneia (P=0.066), e P. agglomerans e taquicardia (P=0.066). Os resultados obtidos descrevem os micro-organismos encontrados no lavado traqueobrônquico de bezerros com DRB em rebanhos de agricultura familiar brasileira e sua relação com as manifestações clínicas da DRB.(AU)

Hematological changes associated with hemoplasma infection in cats in Rio de Janeiro, Brazil / Alterações hematológicas associadas à infecção por hemoplasmas em gatos do Rio de Janeiro, Brasil

Abstract This study aimed to detect Mycoplasma spp. in naturally infected cats from Rio de Janeiro and to evaluate hematological abnormalities and factors associated with this infection. Out of the 197 cats sampled, 11.2% presented structures compatible with hemoplasma organisms on blood smears. In contrast, 22.8% were positive for Mycoplasma spp. by means of 16S rRNA gene real-time polymerase chain reaction, which reflects the weak concordance between techniques. The infection rates, by means of 16S rRNA gene conventional polymerase chain reaction, was 4.6%, 4.6% and 11.7% for Mycoplasma haemofelis (Mhf), ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ (CMt) and ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ (CMhm), respectively. Mhf and CMhm infections are more frequent in the summer (p>0.05). Presence of anemia (p < 0.02), lymphocytosis (p < 0.03), thrombocytopenia (p < 0.04) and activated monocytes (p < 0.04) was associated with Mhf infection. No hematological abnormality was associated with CMt or CMhm infection. Male cats were more prone to be infected by Mhf or CMhm (p < 0.01). Adult cats had more chance to be infected by CMhm. Three hemoplasma species occur in the metropolitan region of Rio de Janeiro and Mhf seems to be the most pathogenic of them. Anemia is the most important hematological abnormality.

Resumo Este estudo teve por objetivo detectar Mycoplasma spp. em gatos naturalmente infectados do Rio de Janeiro e avaliar as alterações hematológicas e fatores associados à infecção. Dos 197 gatos amostrados, 11,2% apresentaram estruturas compatíveis com hemoplasmas em esfregaços de sangue. Em contraste, 22,8% foram positivas para Mycoplasma spp. por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR), baseado no gene 16S rRNA, o que reflete a fraca concordância entre as técnicas. As taxas de infecção, por meio da reação em cadeia da polimerase convencional baseada no gene 16S rRNA, foi de 4,6%, 4,6% e 11,7% para Mycoplasma haemofelis (Mhf), 'Candidatus Mycoplasma turicensis' (CMt) e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' (CMhm), respectivamente. Infecção por Mhf e CMhm foram mais frequentes no verão (p> 0,05). Anemia (p<0,02), linfocitose (p<0,03), trombocitopenia (p<0,04), e presença de monócitos ativados (p<0,04) foram associados à infecção por Mhf. Nenhuma alteração hematológica foi associada à infecção por CMt ou CMhm. Gatos machos estão mais propensos à infecção por Mhf ou CMhm (p<0,01). Gatos adultos têm maiores chances de se infectarem por CMhm. Há ocorrência de três espécies de hemoplasmas na Região Metropolitana do Rio de Janeiro e Mhf parece ser o mais patogênico, tendo a anemia como principal alteração hematológica.

Frequency and hematological alterations of different hemoplasma infections with retrovirusis co-infections in domestic cats from Brazil / Frequência e alterações hematológicas causadas por diferentes infecções por hemoplasmas com co-infecções por retrovírus em gatos domésticos do Brasil

Mycoplasma haemofelis is the agent of feline infectious anemia, although Candidatus M. haemominutum can also be associated. This study evaluated the frequency and hematological alterations caused by hemoplasma infections and co-infections with FeLV, FIV and Toxoplasma gondii in domestic cats from two distinct areas (urban - G1 and periurban - G2) of Brasília, Brazil. One hundred cats were evaluated, 51 from the G1 area and 49 from G2. No cats were positive for T. gondii. Hemoplasma infection was diagnosed in 33% cats from G1 and 32.6% from G2 (p>0.05). In G1 35.3% of the positive cats were infected with Mycoplasma haemofelis, 47.06% with Candidatus Mycoplasma haemominutum and 17.64% with mixed hemoplasma species infection; 12.5% of the cats identified as PCR positive in G2 were infected with Mycoplasma haemofelis, 18.75% with Candidatus Mycoplasma haemominutum and 68.75% with mixed infection. Cats from the periurban area had higher mixed hemoplasmas infection rates than those from urban area, and most of them were asymptomatic carriers. Cytology results were positive in only 5% of cats from G1. Mycoplasma haemofelis infected cats had normocytic normochromic anemia while the cats infected with Candidatus Mycoplasma haemominutum or with both species did not. 37.2% of G1 cats were co-infected with Mycoplasma haemofelis and FeLV, and presented lower PCV and hemoglobin concentration than those infected only with Mycoplasma haemofelis. The co-infection with Candidatus Mycoplasma haemominutum and FeLV produced lower WBC, segmented cells and platelets, and increased total protein concentration.

Mycoplasma haemofelis é o principal agente causador da anemia infecciosa felina, apesar de outras espécies de hemoplasmas, Candidatus M. haemominutum e Candidatus M. turicensis, também estarem associadas à hemoplasmose felina. O presente estudo avaliou a frequência de hemoplasmas, as principais alterações hematológicas associadas com a infecção e co-infecções com FeLV, FIV e Toxoplasma gondii em gatos domésticos de duas áreas diferentes (urbana - G1 e periurbana - G2) de Brasília, Brasil. 100 gatos foram avaliados, 51 de G1 e 49 de G2. Nenhum gato foi positivo para T. gondii. Hemoplasmose foi diagnosticada em 33% dos gatos de G1 e 32,6% de G2 (p>0,05). Em G1, 35.3% dos gatos hemoplasma positivos estavam infectados por Mycoplasma haemofelis, 47,06% por Candidatus Mycoplasma haemominutum e 17,64% apresentaram infecção concomitante por Mycoplasma haemofelis e Candidatus Mycoplasma haemominutum. Em G2, 12,5% dos gatos hemoplasma positivos estavam infectados por Mycoplasma haemofelis, 18,75% por Candidatus Mycoplasma haemominutum e 68,75% apresentaram infecção concomitante por Mycoplasma haemofelis e Candidatus Mycoplasma haemominutum. Gatos da região periurbana eram, em sua maioria, assintomáticos e apresentaram mais infecção concomitante por duas espécies de hemoplasmas do que gatos da região urbana. Os resultados da citologia foram positivos apenas em 5% dos gatos de G1. Gatos com infectados apenas com Mycoplasma haemofelis apresentaram anemia normocítica normocrômica e gatos com infecção única com Candidatus Mycoplasma haemominutum ou em combinação com Mycoplasma haemofelis não apresentaram alterações hematológicas. 37,2% dos gatos de G1 estavam co-infectados por Mycoplasma haemofelis e FeLV, e apresentaram VG e concentração de hemoglobina menores do que os gatos infectados apenas por Mycoplasma haemofelis.[...]

Frequency and hematological alterations of different hemoplasma infections with retrovirusis co-infections in domestic cats from Brazil / Frequência e alterações hematológicas causadas por diferentes infecções por hemoplasmas com co-infecções por retrovírus em gatos domésticos do Brasil

Mycoplasma haemofelis is the agent of feline infectious anemia, although Candidatus M. haemominutum can also be associated. This study evaluated the frequency and hematological alterations caused by hemoplasma infections and co-infections with FeLV, FIV and Toxoplasma gondii in domestic cats from two distinct areas (urban - G1 and periurban - G2) of Brasília, Brazil. One hundred cats were evaluated, 51 from the G1 area and 49 from G2. No cats were positive for T. gondii. Hemoplasma infection was diagnosed in 33% cats from G1 and 32.6% from G2 (p>0.05). In G1 35.3% of the positive cats were infected with Mycoplasma haemofelis, 47.06% with Candidatus Mycoplasma haemominutum and 17.64% with mixed hemoplasma species infection; 12.5% of the cats identified as PCR positive in G2 were infected with Mycoplasma haemofelis, 18.75% with Candidatus Mycoplasma haemominutum and 68.75% with mixed infection. Cats from the periurban area had higher mixed hemoplasmas infection rates than those from urban area, and most of them were asymptomatic carriers. Cytology results were positive in only 5% of cats from G1. Mycoplasma haemofelis infected cats had normocytic normochromic anemia while the cats infected with Candidatus Mycoplasma haemominutum or with both species did not. 37.2% of G1 cats were co-infected with Mycoplasma haemofelis and FeLV, and presented lower PCV and hemoglobin concentration than those infected only with Mycoplasma haemofelis. The co-infection with Candidatus Mycoplasma haemominutum and FeLV produced lower WBC, segmented cells and platelets, and increased total protein concentration.(AU)

Mycoplasma haemofelis é o principal agente causador da anemia infecciosa felina, apesar de outras espécies de hemoplasmas, Candidatus M. haemominutum e Candidatus M. turicensis, também estarem associadas à hemoplasmose felina. O presente estudo avaliou a frequência de hemoplasmas, as principais alterações hematológicas associadas com a infecção e co-infecções com FeLV, FIV e Toxoplasma gondii em gatos domésticos de duas áreas diferentes (urbana - G1 e periurbana - G2) de Brasília, Brasil. 100 gatos foram avaliados, 51 de G1 e 49 de G2. Nenhum gato foi positivo para T. gondii. Hemoplasmose foi diagnosticada em 33% dos gatos de G1 e 32,6% de G2 (p>0,05). Em G1, 35.3% dos gatos hemoplasma positivos estavam infectados por Mycoplasma haemofelis, 47,06% por Candidatus Mycoplasma haemominutum e 17,64% apresentaram infecção concomitante por Mycoplasma haemofelis e Candidatus Mycoplasma haemominutum. Em G2, 12,5% dos gatos hemoplasma positivos estavam infectados por Mycoplasma haemofelis, 18,75% por Candidatus Mycoplasma haemominutum e 68,75% apresentaram infecção concomitante por Mycoplasma haemofelis e Candidatus Mycoplasma haemominutum. Gatos da região periurbana eram, em sua maioria, assintomáticos e apresentaram mais infecção concomitante por duas espécies de hemoplasmas do que gatos da região urbana. Os resultados da citologia foram positivos apenas em 5% dos gatos de G1. Gatos com infectados apenas com Mycoplasma haemofelis apresentaram anemia normocítica normocrômica e gatos com infecção única com Candidatus Mycoplasma haemominutum ou em combinação com Mycoplasma haemofelis não apresentaram alterações hematológicas. 37,2% dos gatos de G1 estavam co-infectados por Mycoplasma haemofelis e FeLV, e apresentaram VG e concentração de hemoglobina menores do que os gatos infectados apenas por Mycoplasma haemofelis. A co-infecção por Candidatus Mycoplasma haemominutum e FeLV resultou em baixo número de leucócitos, segmentados e plaquetes, além de aumento das concentrações de proteínas totais.(AU)

Infecciones de transmisión sexual silentes: la muestra de orina permite una adecuada detección / Non symptomatic sexually transmitted infections: urine sample allows an adequate detection

Detection of non-symptomatic sexually transmitted infections (NSSTD) has taken great relevance, primarily due to global increase. This has led to implement various laboratory techniques with the aim of early detection of these silent infections to decrease the incidence. Techniques usually used for the detection and identification of NSSTD require invasive samples (blood, citobrush, etc.), so the urine could be a simpler option and noninvasive sample when the patient be subjected to test for some of these infections.

La detección de infecciones de transmisión sexual silentes (ITSS) ha tomado gran relevancia, debido principalmente a su incremento en el mundo. Esto ha llevado a implementar diversas técnicas de laboratorio con la finalidad de la detección precoz de estas infecciones silentes para disminuir su incidencia. Las técnicas que habitualmente se utilizan para la detección e identificación de ITSS requieren de una muestra invasora (sangre, citobrush, entre otras), por lo que la orina podria ser una opción de muestra más simple y no invasora al momento que el paciente se deba someter a un examen para detectar alguna de estas infecciones.

Ocorrência de Mollicutes e Ureaplasma spp. em surto de doença reprodutiva em rebanho bovino no Estado da Paraíba / Occurrence of Mollicutes and Ureaplasma spp. in outbreak of reproductive disease in cattle herds, State of Paraíba, Brazil

Em março de 2012 foi diagnosticado um surto de doença reprodutiva em rebanho bovino no Estado da Paraíba, Brasil. Foram examinadas 32 vacas e dois touros da raça Girolando. As vacas apresentaram sinais de doença reprodutiva como repetição de cio, vulvovaginite granular, infertilidade e abortos. As amostras de suabes vaginais e prepuciais foram colhidas e submetidas a isolamento bacteriano e PCR. As reações da PCR para Mollicutes e Ureaplasma spp. foram realizadas com os iniciadores MGSO-GPO3 e UGP'F-UGP'R, respectivamente. Na Nested PCR para Ureaplasma diversum, os iniciadores usados foram UD1, UD2, UD3 e UD4. Para isolamento bacteriano, as amostras foram diluídas de 10-1 até 10-5, semeadas em meio "UB", líquido e placa, sendo incubadas por até 21 dias a 37ºC em jarra de microaerofilia. A frequência de Mollicutes detectada na PCR foi de 65,6% e para Ureaplasma spp. foi de 50,0%, enquanto que para U. diversum foi de 15,6%. No isolamento a frequência de Mollicutes foi de 57,1% e para Ureaplasma spp. foi de 28,6%. No ágar "UB" foi visualizado o crescimento misto de Mycoplasma spp. e Ureaplasma spp. em seis amostras. Foi confirmado o envolvimento de micro-organismos da Classe Mollicutes em surto de doença reprodutiva em vacas no sertão paraibano.

In March of 2012 was investigated a reproductive disease outbreak in cattle herds from Paraíba State, Brazil. Were examined 32 cows and two bulls Giroland breed. The cows showed signs and symptoms of reproductive failure such as repeat breeding, granular vulvovaginitis, infertility and abortions. Vaginal and preputial mucous samples were collected for analysis by PCR and isolation. The PCR reactions for Mollicutes and Ureaplasma spp. were realized with primers MGSO and GPO3, and UGP'F and UGP'R respectively. The nested PCR assay for Ureaplasma diversum was realized with primers UD1, UD2, UD3 and UD4. For bacteriologic isolation, obtained samples were diluted up to 10-1 at 10-5, inoculated into liquid and solid "UB" medium, and incubated for up to 21 days, at 37ºC in microaerophilie jar. In the PCR reactions the frequency of Mollicutes detected in the analyzed vaginal mucous samples was 65.6, for Ureaplasma spp. was 50.0, while for U. diversum was 15.6. The frequency for isolation of Mollicutes was of 57.1 and for Ureaplasma spp. was of 28.6. In the UB agar was visualized growth of Mycoplasma spp. and Ureaplasma spp., associated in six of the samples. In the cows the presence of Mollicutes and Ureaplasma spp. was confirmed for the reproductive disease outbreak in the semiarid region of Paraiba.

Uso da técnica de Southern Blot/Hibridização associada à reação em cadeia da polimerase para aumentar a sensibilidade no diagnóstico das infecções por hemoplasmas em gatos domésticos: Use of Southern Blot/Hybridization technique associated to polymerase chain reaction to improve the sensitivity in the diagnosis of hemoplasma infections in domestic cats

O objetivo deste trabalho foi verificar se a técnica de Southern Blot/Hibridização (SB) em associação à reação de polimerização em cadeia (PCR) aumenta a sensibilidade na detecção de DNA de hemoplasmas em gatos domésticos (Felis catus). O sangue total foi coletado em tubos contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra-acético, o DNA extraído a partir de 149 animais e a PCR realizada com o uso de sequências iniciadoras espécie-específicas, para amplificar subunidade 16S do RNA ribossomal de Mycoplasma haemofelis e 'Candidatus M. haemominutum' dessas amostras. Para a hibridização, foram utilizadas sondas específicas quimicamente marcadas, e os resultados visualizados por meio da adição de substrato quimiluminescente seguida de autoradiografia. Dezoito (12,1%) das 149 amostras testadas apresentaram resultado PCR-positivo para o DNA de hemoplasmas. A técnica de SB mostrou que 24/149 (16,1%) amostras apresentaram resultado positivo para hemoplasmas, confirmando os 18 resultados PCR-positivos, além de revelar seis outros adicionais (p < 0,001). O método de SB com sondas específicas mostrou-se mais sensível do que a PCR realizada isoladamente, sendo complementar para o diagnóstico das infecções causadas pelos hemoplasmas felinos.

The aim of this study was to determine whether Southern Blot/Hybridization (SB) associated to Polymerase Chain Reaction (PCR) improves the sensitivity in the detection of hemoplasma DNA in domestic cats (Felis catus). Whole blood was collected in tubes containing the anticoagulant ethylenediamine tetra-acetic acid and DNA extracted from 149 animals. PCR was performed using species specific primers to amplify the 16S ribosomal RNA subunit of Mycoplasma haemofelis and 'Candidatus M. haemominutum' from these samples. Hybridization was performed using a 16S rDNA probes chemically labeled and the results were visualized using a chemiluminescent substrate addition followed by autoradiography. Eighteen (12.1%) of the 149 tested samples had a positive PCR result for hemoplasma species DNA. SB/hybridization technique showed that 24/149 (16.1%) samples were positive for hemoplasmas, confirming the 18 PCR-positive results and reveling six additional positive animals (p < 0.001). SB/hybridization method with specific probes was more sensitive than PCR performed alone, being complimentary to this technique to diagnose infections caused by feline hemoplasmas.

Uso da técnica de Southern Blot/Hibridização associada à reação em cadeia da polimerase para aumentar a sensibilidade no diagnóstico das infecções por hemoplasmas em gatos domésticos: Use of Southern Blot/Hybridization technique associated to polymerase chain reaction to improve the sensitivity in the diagnosis of hemoplasma infections in domestic cats

The aim of this study was to determine whether Southern Blot/Hybridization (SB) associated to Polymerase Chain Reaction (PCR) improves the sensitivity in the detection of hemoplasma DNA in domestic cats (Felis catus). Whole blood was collected in tubes containing the anticoagulant ethylenediamine tetra-acetic acid and DNA extracted from 149 animals. PCR was performed using species specific primers to amplify the 16S ribosomal RNA subunit of Mycoplasma haemofelis and 'Candidatus M. haemominutum' from these samples. Hybridization was performed using a 16S rDNA probes chemically labeled and the results were visualized using a chemiluminescent substrate addition followed by autoradiography. Eighteen (12.1%) of the 149 tested samples had a positive PCR result for hemoplasma species DNA. SB/hybridization technique showed that 24/149 (16.1%) samples were positive for hemoplasmas, confirming the 18 PCR-positive results and reveling six additional positive animals (p 0.001). SB/hybridization method with specific probes was more sensitive than PCR performed alone, being complimentary to this technique to diagnose infections caused by feline hemoplasmas.

O objetivo deste trabalho foi verificar se a técnica de Southern Blot/Hibridização (SB) em associação à reação de polimerização em cadeia (PCR) aumenta a sensibilidade na detecção de DNA de hemoplasmas em gatos domésticos (Felis catus). O sangue total foi coletado em tubos contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra-acético, o DNA extraído a partir de 149 animais e a PCR realizada com o uso de sequências iniciadoras espécie-específicas, para amplificar subunidade 16S do RNA ribossomal de Mycoplasma haemofelis e 'Candidatus M. haemominutum' dessas amostras. Para a hibridização, foram utilizadas sondas específicas quimicamente marcadas, e os resultados visualizados por meio da adição de substrato quimiluminescente seguida de autoradiografia. Dezoito (12,1%) das 149 amostras testadas apresentaram resultado PCR-positivo para o DNA de hemoplasmas. A técnica de SB mostrou que 24/149 (16,1%) amostras apresentaram resultado positivo para hemoplasmas, confirmando os 18 resultados PCR-positivos, além de revelar seis outros adicionais (p 0,001). O método de SB com sondas específicas mostrou-se mais sensível do que a PCR realizada isoladamente, sendo complementar para o diagnóstico das infecções causadas pelos hemoplasmas felinos.